1、发音不同。你普通话读音：nǐ。您普通话读音：nín。

2、使用对象不同。您：用于自己的上级和长辈。你：用于自己的平级和晚辈。

3、表达的尊重程度不同。您：表示自己很尊重对方，即使比自己年龄小的人也需要使用，特别是迎宾工作的人，对任何人都要使用您。你：表示自己与对方等级差不对，甚至是有不尊重对方的含义，即使是比自己年长的人也会使用你，这是一种不文明的用法。

4、在汉语中两者的使用有差别，主要是体现在辈份与地位上。“你”的使用一般是用于和同辈分的人或者比自己辈分低、比自己地位低的人，对于年长的地位低的长者也有人使用，这种时候仅仅表示针对说话对象的一种称呼，不表示尊敬。