1、液氮保藏法，亦称超低温保藏法。主要利用微生物在低于-130°C的低温下新陈代谢趋于停止的原理，在液氮中（-196°C的超低温下）有效地进行菌种保藏的方法。此法操作简便、高效，保藏期一般可达到15年以上，是公认的菌种长期保藏技术之一，并且适用于各类微生物菌种的保藏。但是，采用液氮保藏，需购置超低温液氮设备，且液氮消耗量大，费用高。液氮低温保藏的保护剂，一般选择甘油、二甲基亚砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊环、吐温80等，最常用的是甘油（10%〜20%），不同微生物应选择不同的保护剂，保护剂的浓度应控制在不造成微生物死亡为宜。

2、把微生物细胞混悬于含保护剂（20%甘油，10%DMSO等）的液体培养基中（也可把含菌琼脂块直接浸入含保护剂的培养液中），分装入耐低温的安瓿瓶中后，作缓慢预冷，然后移至液氮罐中的液相（-196℃）或气相（-156℃）作长期超低温保藏。